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浅看原代细胞分离的悬浮细胞分离方法

发布时间:2021-12-15      点击次数:206
 
  原代细胞分离是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程,获得高纯度、高活性的原代细胞则是很多细胞实验成功的关键要素之一。
  原代细胞是直接取自活组织(例如活组织检查材料)的细胞,并建立用于体外生长。这些细胞经历了非常少的群体倍增,因此与连续(肿瘤或人工永生化)细胞系相比,它们更能代表它们所衍生组织的主要功能成分,使得原代细胞成为更具代表性的体内模型。
  所以,自己动手分离原代细胞,是非常有必要的。
  原代细胞分离方法有许多种:悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等,今天,我们主要来看看常用的方法——酶消化法。
  原代细胞分离的悬浮细胞的分离方法:
  1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。
  2、去掉上清,离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。
  3、用培养基重悬,调整适当细胞浓度后分瓶培养。
  4、如选用悬液中某种细胞,可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。
  重点注意事项:
  1、使用细胞分离酶时,请注意温度和湿度条件。如蛋白水解酶可以自动分解,因此建议在使用前立即将其溶解,并在冰上保存2°C~8°C。
  2、通常用于细胞分离的大多数酶可以直接溶解于平衡盐溶液或所选缓冲液中。对于许多细胞分离中,确保解离期间的组织存活,需要孵育培养基充分氧化并在生理pH下缓冲。95%O2、5%CO2平衡的介质来完成。
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