成年小鼠关节软骨细胞原代培养

1. C57小鼠，8-10周，通过颈椎脱位处死，浸入75%乙醇浸泡5分钟，转移到通风柜中的解剖盘中。

2. 使用眼科剪和镊子，使髋关节脱臼，保持股骨头完整。

3. 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽，将组织放入含2%双抗的PBS中。

4. 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍，将关节软骨小心移到2ml离心管中。

5. 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片，加入3ml预热的Collagenase D（1.5mg/ml）。

6. 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化，时间2h 。

7. 第一次消化结束后，加入含血清的培养基终止消化，40um的细胞筛过滤后，离心1500rpm，2min。

8. 沉淀用DMEM培养基重悬，计数，种植在24孔板中。

9. 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D，放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化，时间2h，然后收集细胞。