神经元原代培养的培养步骤具体如下

　　神经元原代培养是一种将胚胎哺乳动物中枢神经系统的部分组织，如大脑皮层、海马、脊髓脑组织等，直接取出后在体外进行接种培养的方法。是将胚胎哺乳动物中枢神经系统的组织取出后，在体外进行培养和研究的实验技术。主要用于研究神经元的生物学特性、神经发生、神经退行性疾病的机理等。

　　神经元原代培养的培养步骤：

　　1、准备实验材料：包括培养基、细胞培养试剂、培养器具等。

　　2、取材：通过异交法得到小鼠胚胎，在胚胎发育第15-17天时取材。

　　3、分离大脑皮层组织：将小鼠胚胎处死后，迅速取出大脑并置于无菌的PBS缓冲液中。移除大脑的外围组织，仅保留皮层组织。

　　4、组织消化：将皮层组织切碎成小块，加入含有0.05%胰蛋白酶和0.1%DNA酶的消化液，室温下消化15-20分钟。

　　5、离心与清洗：将消化液中的细胞悬液离心处理，用PBS缓冲液洗涤1-2次，去除消化液中的酶和杂质。

　　6、细胞计数与分装：通过显微镜和细胞计数板对细胞悬液进行计数，稀释并分装得到所需细胞浓度。

　　7、接种：将细胞悬液接种到预先涂覆了聚-L-赖氨酸的培养皿中，使细胞均匀附着在培养皿表面。

　　8、添加培养基：加入预先配制好的培养基，为细胞提供营养和生长因子。

　　9、培养条件控制：将培养皿放置于恒温培养箱中，保持37°C、95%湿度和5%CO₂浓度。定期更换培养基以维持细胞生长。