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神经元原代培养的培养步骤具体如下

更新时间:2024-05-29      点击次数:179
  神经元原代培养是一种将胚胎哺乳动物中枢神经系统的部分组织,如大脑皮层、海马、脊髓脑组织等,直接取出后在体外进行接种培养的方法。是将胚胎哺乳动物中枢神经系统的组织取出后,在体外进行培养和研究的实验技术。主要用于研究神经元的生物学特性、神经发生、神经退行性疾病的机理等。
  神经元原代培养的培养步骤:
  1、准备实验材料:包括培养基、细胞培养试剂、培养器具等。
  2、取材:通过异交法得到小鼠胚胎,在胚胎发育第15-17天时取材。
  3、分离大脑皮层组织:将小鼠胚胎处死后,迅速取出大脑并置于无菌的PBS缓冲液中。移除大脑的外围组织,仅保留皮层组织。
  4、组织消化:将皮层组织切碎成小块,加入含有0.05%胰蛋白酶和0.1%DNA酶的消化液,室温下消化15-20分钟。
  5、离心与清洗:将消化液中的细胞悬液离心处理,用PBS缓冲液洗涤1-2次,去除消化液中的酶和杂质。
  6、细胞计数与分装:通过显微镜和细胞计数板对细胞悬液进行计数,稀释并分装得到所需细胞浓度。
  7、接种:将细胞悬液接种到预先涂覆了聚-L-赖氨酸的培养皿中,使细胞均匀附着在培养皿表面。
  8、添加培养基:加入预先配制好的培养基,为细胞提供营养和生长因子。
  9、培养条件控制:将培养皿放置于恒温培养箱中,保持37°C、95%湿度和5%CO₂浓度。定期更换培养基以维持细胞生长。
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