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10-12周龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养

更新时间:2024-07-08      点击次数:138

1. 10-12周龄雌性SD大鼠,皮下注射孕马血清促性腺激素Pregnant Mare Serum GonadotropinPMSG 60IU48h后颈椎脱臼处死。

2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。

3. 在距离大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪开皮肤、肌肉,可见白色的脂肪组织,拉出脂肪组织,可见到粉红色的卵巢,摘除卵巢。

4. 取卵巢放入预冷的含双抗的缓冲液中,用缓冲液清洗卵巢三次,去除周围组织及表面包膜。

5. 在解剖显微镜下用1mL的注射器刺破卵泡,释放颗粒细胞。

6. 将悬液通过70μm筛网过滤至50ml离心管中,之后200g,离心7min

7. 计数,种植到24孔板和大皿中。

8. FSHR表达鉴定颗粒细胞。

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