原代细胞分离是指从动物或人体组织中直接分离出细胞,并将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程。是直接取自活组织的细胞,用于体外生长。这些细胞经历了非常少的群体倍增,因此与连续(肿瘤或人工永生化)细胞系相比,它们更能代表所衍生组织的主要功能成分,成为更具代表性的体内模型。
1、机械分离法:
主要适用于纤维组织和肌肉组织等坚硬组织。
操作步骤:先将样品用钳子或剪刀细剁成小碎片,再用组织破碎机或匀浆器等器械破碎,使细胞得以自由分散。最后通过滤网将细胞分离。
2、酶消化法:
是将组织分解成单个细胞的常用方法。
通过选用合适酶的不同浓度、作用时间和温度,可以使不同类型的细胞得到分离。
常用的消化酶有胶原酶、胰蛋白酶等。
3、贴壁法:
主要适用于基质附着型细胞,例如成肌细胞、成纤维细胞等。
操作步骤:将组织切成适当大小的小块,置于培养皿中,加入培养液。经过一段时间后,未附着于基质的细胞会被洗掉,贴着基质的细胞则会继续生长。
4、悬浮培养法:
适用于以血液为基础的细胞,例如淋巴细胞、白血细胞等。
操作步骤:将血液加入离心管中,慢慢离心分离淋巴细胞、单核细胞等,最后将上清液转移到新的培养皿中。