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新生大鼠脊髓来源的小胶质细胞分离和培养

更新时间:2025-07-09      点击次数:26

一、 解剖新生大鼠的脊髓组织

1. 用温热的生理盐水擦拭P2天的新生鼠;

2. 用70%乙醇冲洗P2新生鼠;

3. 分离脊髓,放入装有L-15溶液的培养皿中;

4. 剥离脊膜,转移脊髓到装有L-15溶液的培养皿中。


二、 制备混合胶质细胞群

1. 清洗所有P2新生鼠的脊髓组织;

2. 把脊髓剪成小块;

3. 加入新鲜的DMEMwan全培养基4-5ml,吹打10-15次;

4. 用100um的滤器过滤;

5. 离心2500RCF/5min/4℃。


三、 种植混合胶质细胞群

1. 4个P2新生鼠脊髓组织混合细胞群种到一个T-75培养瓶中;

2. 第5天全量换液,之后每3天全量换液。


四、 原代小胶质细胞的分离和培养

1. 2-3周,当混合的细胞群长满T-75培养瓶底;

2. 在37℃以150rps的速度摇动T-75培养瓶2小时;

3. 用移液管从所有T-75培养瓶中收集培养基,不要破坏培养瓶表面的星形胶质细胞层;

4. 离心2500RCF/5min/4℃;

5. 吸取上清液,将沉淀重悬于1 ml小胶质细胞培养基中;

6. 计数;

7. 种植小胶质细胞。


五、 代表性结果

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