原代细胞分离实验服务的主流分离方法分别是什么？

　　原代细胞分离实验服务是生物医学研究领域的重要技术支撑，其核心在于从活体组织中精准分离出单细胞群体，为疾病机制解析、药物筛选及个体化治疗提供接近体内真实状态的细胞模型。基于细胞间连接结构的破坏与单细胞悬液的制备。实体组织中，细胞通过胶原蛋白、钙黏蛋白等形成三维网络，直接培养仅能支持周边细胞生长，内部细胞因缺氧和营养匮乏难以存活。因此，需通过物理或化学方法破坏细胞间连接，同时避免过度损伤细胞膜和细胞器。

　　原代细胞分离的主流分离方法：

　　1、酶消化法

　　采用胰蛋白酶、胶原酶或Dispase等蛋白水解酶，通过水解细胞间质蛋白质实现解离。例如，分离小鼠结肠上皮细胞时，使用0.1%胶原酶I和0.3%分散酶II在37℃下消化25分钟，可高效分散细胞间质。服务提供商通常根据组织类型定制酶组合，如针对肿瘤组织采用胶原酶Ⅳ联合机械研磨，提高致密组织的解离效率。

　　2、差速贴壁法

　　针对混合细胞群（如成纤维细胞与上皮细胞共存），利用不同细胞贴壁速度的差异进行纯化。成纤维细胞贴壁较快（10-20分钟），而上皮细胞需更长时间（30-60分钟），通过分阶段收集未贴壁细胞可获得高纯度目标细胞。此方法在角膜上皮细胞、肝细胞分离中广泛应用。

　　3、密度梯度离心法

　　利用Ficoll、Percoll等介质形成连续密度梯度，通过离心使细胞按密度分层。例如，分离外周血单核细胞时，将细胞悬液置于Percoll梯度上层，离心后收集特定层面的细胞，可去除红细胞和血小板污染。