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大脑皮层神经元原代培养的步骤你有去了解过吗?

发布时间:2021-12-06      点击次数:149
 
  大脑皮层神经元原代培养是将胚胎哺乳动物中枢神经系统的部分组织,如大脑皮层、海马、脊髓等脑组织直接取出,再接种培养的方法。目前国内、外有关神经元培养的方法较多,但在原代培养中神经元的纯度和产量方面还存在一些急待解决的问题。由于神经元是一种高度分化的细胞,相对于其它细胞而言,神经元在体外更难以存活和生长。因此,体外培养神经元要求的培养方法和营养条件均较为特殊。
  大脑皮层神经元原代培养的步骤:
  1、于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠脑;
  2、预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗,用眼科剪将皮质反复剪切成碎块;
  3、移入培养皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,37℃培养箱中消化30min;
  4、将皮层组织碎块移入离心管,弃去剩余消化液,用接种液洗3次,每次洗涤后使组织块充分沉降到试管底,弃去上清液;
  5、最后再用接种液1ml混悬,反复吹打(巴氏吸管)混悬液中组织块,力度适中,至浑浊后将上清液移入培养瓶待用;
  6、加入1ml接种液后再次吹打,如此反复3-4次,组织块逐渐消化后,弃去最终残块;
  7、收集含单细胞悬液的上清液约4-5ml于培养瓶中,以接种液重新悬浮细胞,细胞记数;接种1x107个细胞于6孔培养板中;
  8、培养24h至细胞贴壁后,换全培养液(DMEM/F12+2%B27,engreen)培养3d,观察神经元生长状况;
  9、换用阿糖胞苷培养液(终浓度2.5ug/ml,换半液)培养3d以抑制神经胶质细胞及杂细胞生长,获得单纯培养的原代神经细胞;
  10、每隔3d换全培养液1次,每次换半液。
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