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透射电镜检测时的取材要求是什么?

发布时间:2021-12-24      点击次数:80
 
  透射电镜检测是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向,从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关,因此可以形成明暗不同的影像。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备超薄切片(通常为50~100nm)。要在机体死亡后的数分钟内取材,组织块要小(1mm3以内),常用戊二醛和锇酸双重固定,包埋介质包埋,用超薄切片机切成薄片,再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。
  透射电镜检测的取材要求:
  1、定位准确:解剖水平的准确定位误差应≤1mm。注意各组实验动物取材区位及方位的*性和代表性。
  2、操作迅速:组织离开活体后,以zui快的速度浸入戊二醛固定液,0.5min或zui多2min。事先准备好l1.5ml尖头PEP管里面盛满预冷的戊二醛固定液。
  3、标本尺寸大小:组织块大小需要在1mm3左右,样品太大会导致样品固定不充分。(提示:把较大标本块修整成符合要求的颗粒时,须事先准备一个蜡盘,滴入戊二醛固定液,把标本浸在液滴中修整,确认每个小标本颗粒都包含需要的结构内容,用牙签挑出3~5粒标本,放入l1.5ml尖头PEP管。)
  4、保持低温环境:为降低自溶酶活性,在4℃低温条件下取材,容器和器械预冷;将修整好的标本块放入戊二醛固定液后,普通4℃冰箱保存。细胞取材流程及要求
  取材流程:细胞直接刮下,细胞悬液离心,弃上清,PBS清洗2次,离心成团,加入2.5%戊二醛固定液4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为细胞悬浮液操作。
  固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到PBS中,后续操作*。
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