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浅看免疫组化技术服务的切片制备

发布时间:2021-12-20      点击次数:82
 
  免疫组化技术服务是伊莱博生物实验组成之一,作为常见实验,日常实验之一。该实验由从事动物实验专业,经验丰富的人员进行操作。免疫组化,是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究方法。
  免疫组化技术服务的切片制备:
  1、洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了将载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中,然后放到架子上,置于37°C温箱中,将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面,由于Lys带正电,而大多数的组织带负电荷,从而产生吸附作用。
  2、包埋组织:先在铁模具中加入一些液态石蜡,先稍微冷却,然后再将待包埋的组织置于石蜡之中,并排列整齐,再将塑料模具盒盖上,后加入少许液体石蜡,进行冷冻,使石蜡变成固态。
  3、切片:将包埋好的组织从模具上取下来,并置于石蜡切片机上,切片机通过调节上下左右来使组织和切割方向一致,然后调节切片的厚度,一般为5mm,如果比较难切,则可以适当调整厚度。用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。
  4、捞组织:当组织载玻片置于40°C温水中之前,要先将水浴中的气泡赶走,以免气泡受热上浮而贴到组织上,组织受热展开,好是组织不起皱纹,用载玻片捞组织时,一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张,其中2-3张是备用的,每张载玻片上通常捞两份组织,做对照使用,这样形成的误差就比较小了,而且捞载玻片的时候好方向一致,以便观察,再将捞出来的载玻片置于架子上,放入37°C温箱中烘干。
伊莱博生物科技(上海)有限公司
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