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1.样品准备:将待测样品进行定量计算出样品蛋白浓度;
2.蛋白还原烷基化及酶解:每组样品各取100ug按照iTRAQ试剂禽要求进行处理,使用测序级****溶液酶解后,超滤管离心收集酶解肽段;
3.iTRAQ标记:将iTRAQ试剂平衡到室温,用150uL异丙.醇溶解,取酶解肽段加入iTRAQ试剂后室温反应2h,加入水终止反应,等量混合不同组样品,真空冷冻干燥样品;
4.LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrao进行串联质谱鉴定。
5,数据处理及生信分析
itraq/TMT 是多肽体外标记定量技术,利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或者赖氨酸侧链基团,不同分子量的试剂对不同来源的样品进行标记从而实现不同样品间蛋白质组的比较
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