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组织固定
取材后立即浸泡于4%多聚甲醛(4℃),固定时间≥48小时
特殊组织(如骨/软骨)需EDTA脱钙4周
脱水与透明
梯度乙醇脱水:75%→85%→90%→95%→无水乙醇(每步30分钟~4小时)
二甲苯透明:2次×10分钟
石蜡包埋
浸蜡:3次×1小时(60℃石蜡)
包埋后4℃定型≥10小时
切片制备
厚度5 μm,45℃恒温水浴摊片
37℃烤箱烤干(防脱片)
脱蜡与水化
二甲苯脱蜡:3次×5分钟
梯度乙醇水化:无水乙醇→90%→80%→70%→纯水(每步5分钟)
核质染色
苏木精染色:5~10分钟
分化:1%盐酸酒精5~10秒,流水返蓝10分钟
胞质染色
伊红染色:10秒~2分钟(根据组织类型调整)
脱水与封片
快速梯度乙醇脱水(80%→95%→无水乙醇)
二甲苯透明,中性树胶封片
显微镜设置:
常用放大倍数:200×(海马组织)、400×(脊髓/肺组织)
标尺标注:如20 μm(脊髓切片)
典型结构:
细胞核(蓝色)、胞质/胶原(粉红色)
质量控制
避免切片褶皱或脱片(烤片时间需充足)
分化时间精确控制,防止过染
特殊组织处理
神经组织需缩短伊红染色时间(防止过深)
肌腱/软骨注意脱钙完整性
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