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大鼠心脏免疫组化实验服务

简要描述：大鼠心脏免疫组化实验服务是伊莱博生物的基础服务项目之一，由经验丰富的实验人员操作完成。

  • 更新时间：2025-05-20
  • 厂商性质：代理商
  • 访  问  量：1394
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一、实验前准备

  1. ‌样本处理‌

    • 需取大鼠心脏组织，去除周围血管和结缔组织，经4%多聚甲醛固定后石蜡包埋或OCT包埋冷冻切片58

    • 新生大鼠心脏需用D-Hanks液冲洗残留血细胞，组织块消化采用0.08%蛋白酶分次消化4

  2. ‌主要试剂与仪器‌

    • 一抗（如心钠素抗体、Col Ⅰ/Ⅲ抗体）、二抗、DAB显色试剂

    • 需准备CO₂培养箱、倒置显微镜、离心机等设备

二、实验操作流程

  1. ‌切片制备‌

    • 石蜡切片厚度建议5μm，需经脱蜡、水化及抗原修复处理

    • 冷冻切片需避免反复冻融，厚度通常为8-10μm

  2. ‌免疫染色‌

    • 阻断内源性过氧化物酶（3% H₂O₂）

    • 血清封闭后滴加一抗（4℃过夜）

    • 二抗孵育及DAB显色

    • 采用ABC法或PAP法，步骤包括：

    • 荧光染色需避光操作，常用荧光二抗标记

  3. ‌对照设置‌

    • 需设阴性对照（PBS替代一抗）和阳性对照（已知阳性组织）

三、结果分析

  1. ‌显微镜观察‌

    • 心钠素阳性颗粒主要分布于心房肌细胞胞质，右心耳表达

    • 胶原纤维（Col Ⅰ/Ⅲ）可通过Masson染色辅助评估纤维化程度

  2. ‌图像处理‌

    • 使用图像分析软件定量阳性信号面积或光密度值

四、注意事项

  • 组织固定时间不超过24小时，避免抗原丢失

  • 蛋白酶消化新生心肌细胞时需严格控制时间（第一次8分钟，后续2分钟/次）

  • 力竭运动模型可能影响心钠素表达，需规范动物分组

如需特定蛋白（如P物质、心房肽）的检测方法，可进一步结合荧光染色或乙醛酸诱发荧光法



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