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原位杂交实验步骤
原位杂交第一天进行重新水化和固定、预杂交、杂交。
原位杂交第二天进行1将探针回收,放千-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1号
升,60℃,放置30分钟,重复一次。3置换2XSSCT1ml,60℃,放置15分钟。4置换0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分钟
重复一次。5用MABT洗两次,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。6室温下加1ml1:2:7溶液,时间为一小时。 7 按1:
3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶连地高XIN抗体,4C 冰箱过夜。
原位杂交第三天进行1)用1ml含10%热灭活血清的MABT溶液置换抗体溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mIMABT置换
25分钟,再用1mIMABT溶液置换,一小时以上,最后用1mlMABT溶液置换,25分钟。2)用1ml 1mM**米唑的Stainino
buffer洗一次,每次放置五分钟。3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer.加上300ulBM Purple AP Substrate(底
物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。4)每隔一小时观察胚胎是否开
始显色5)将显色的胚胎中的底物吸出,用PBST洗两三次后加上4%多聚.甲醛固定,拍照。6)4C冰箱保存。
我们拥有专业的实验室、精良的实验设备和经验丰富的科研技术人员。技术团队包括研究员(博士后)2人,助理研究员(博士)4人,核心研究员(硕士)15人,主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。通过高度细分、较好的的服务平台,为广大客户提供了完善的技术解决方案和服务。目前,及,涉及临床医学、肿瘤生物学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学、医学等诸多领域。
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