氨基核苷嘌呤霉素诱导的大鼠肾病变模型

一、模型核心原理

1. 直接抑制足细胞 DNA/RNA 合成，破坏细胞骨架（如 nephrin、podocin、CD2AP）

2. 诱导足细胞产生 ROS，引发氧化应激损伤

3. 导致足突广泛融合、滤过屏障破坏 → 大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症（肾病综合征 “三高一低"）

4. 急性模型多为微小病变；多次 / 追加给药可进展为慢性 FSGS

二、实验动物与试剂

1. 动物

• 品系：雄性 SD 大鼠（首xuan，成模率＞90%）或 Wistar 大鼠

• 体重：200–250 g（6–8 周龄，性成熟、代谢稳定）

• 性别：雄性（雌性雌激素有保护作用，成模率低）

2. 试剂

• 造模剂：嘌呤霉素氨基核苷（PAN），纯度≥98%

• 溶剂：无菌生理盐水（0.9% NaCl）

• 对照：等体积无菌生理盐水

三、造模方法（两种经典方案）

方案一：单次尾静脉注射（急性微小病变模型，常用）

1. 准备

• 大鼠禁食8 h（不禁水），减少呕吐与注射反应

• PAN 用无菌生理盐水配成15 mg/mL（或 150 mg/kg 浓度），0.22 μm 滤过除菌

2. 注射（关键）

• 尾静脉缓慢推注：150 mg/kg（15 mg/100 g），注射时间≥5 min（防急性肾损伤 / 死亡）

• 对照组：等体积生理盐水尾静脉注射

3. 时间进程（经典）

• 第 3–5 天：开始出现蛋白尿

• 第 8–10 天：24 h 尿蛋白达峰（200–300 mg/24h，为正常 10–20 倍）

• 第 10–14 天：低白蛋白血症、高脂血症显著

• 第 2–4 周：自发缓解（蛋白尿下降、肾功能恢复）

方案二：多次 / 追加注射（慢性 FSGS 模型）

1. 多次皮下注射（8 天方案）

• 每日皮下注射PAN 15 mg/kg，连续8 天

• 第 4 周后出现持续性蛋白尿、肾小球局灶节段硬化（FSGS）

2. 追加给药方案（慢性进展）

• 第 0 天：尾静脉注射PAN 40 mg/kg

• 第 13、16、19 天：尾静脉追加PAN 5 mg/kg/ 次，共 3 次

• 第 4–8 周：持续大量蛋白尿、FSGS、间质纤维化、肾功能下降

四、实验分组（标准设计）

1. 正常对照组（Control）：等体积生理盐水

2. PAN 模型组（Model）：单次 / 多次 PAN 注射

3. 阳性药组（Positive）：PAN + 泼ni松 / ta克莫司 / 雷gong藤等

4. 受试药组（Treatment）：PAN + 不同剂量受试药

五、模型鉴定（核心指标）

1. 尿液指标（金标准）

• 24 h 尿蛋白定量：显著升高（＞150 mg/24h）

• 尿微量白蛋白 / 肌酐比值（ACR）：升高

• 尿沉渣：无明显红细胞 / 管型（微小病变特点）

2. 血液生化（肾病综合征特征）

• 血清白蛋白（Alb）：显著降低（＜25 g/L）

• 总胆gu醇（TC）、甘油三酯（TG）：显著升高（3–5 倍）

• 总蛋白（TP）：降低

• 血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）：急性模型早期正常；慢性 FSGS 模型升高

3. 肾脏病理（核心）

光镜（HE/PAS/Masson）

• 急性模型：肾小球基本正常，无明显细胞增殖 / 硬化；肾小管可见蛋白管型

• 慢性模型：局灶节段性肾小球硬化（FSGS）、系膜基质增多、间质纤维化、肾小管wei缩

电镜（确诊关键）

• 足突广泛融合、消失（微小病变特征）

• 足细胞空泡变性、胞质脱落

• 无电子致密物沉积（与免疫复合物肾病鉴别）

免疫荧光

• 无明显 IgG/IgA/C3 沉积（排除免疫介导肾病）

4. 分子指标（足细胞损伤）

• 足细胞标志物：nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin（mRNA / 蛋白表达↓）

• 纤维化：TGF-β1、α-SMA、Col-I（慢性模型↑）

• 炎症：TNF-α、IL-1β（轻度↑）