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Brdu免疫荧光染色

简要描述：Brdu免疫荧光染色 BrdU是另外一种胸腺嘧啶核苷类似物。它也能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。

更新时间：2026-03-20
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一、原理

BrdU（溴脱氧尿苷）是胸腺嘧啶类似物，可在S 期掺入新合成 DNA。

通过抗 BrdU 抗体 + 荧光二抗标记，荧光阳性细胞 = 正在增殖 / 近期增殖的细胞。

二、适用样本

细胞爬片（体外培养细胞）
冰冻切片 / 石蜡切片（小鼠脑组织、肿瘤、肠黏膜、肝脏等）

三、标准实验步骤（免疫荧光法）

1. BrdU 标记

细胞：加入终浓度 10–50 μM BrdU，孵育 2–24 h
动物：腹腔注射 50–100 mg/kg，2 h 后取材

2. 固定

4% PFA 固定 15–30 min → PBS 洗

3. 通透与变性（关键步骤）

0.2% Triton X-100 通透 10 min
2N HCl 37℃ 变性 30 min（解开 DNA 双链，暴露 BrdU）
0.1M 硼酸钠中和 10 min

4. 封闭

10% 山羊血清室温封闭 1 h

5. 一抗孵育

Mouse anti-BrdU 一抗

4℃ 过夜

6. 荧光二抗

FITC/PE/Cy3 荧光二抗

室温避光 1 h

7. 复染与封片

DAPI 染核（蓝色）

抗荧光淬灭封片

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Brdu免疫荧光染色

一、原理

二、适用样本

三、标准实验步骤（免疫荧光法）

1. BrdU 标记

2. 固定

3. 通透与变性（关键步骤）

4. 封闭

5. 一抗孵育

6. 荧光二抗

7. 复染与封片

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