甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)是一种用于检测DNA甲基化状态的高灵敏度技术。其基本原理是利用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,使未甲基化的胞嘧啶(C)转化为niao嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后,设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR扩增,通过琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物,从而确定DNA序列的甲基化状态。以下是MSP甲基化检测的详细步骤和注意事项:
MSP的基本原理是用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶(C)转化为niao嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶(5mC)保持不变。随后,设计两对特异性引物,分别针对甲基化和非甲基化序列进行PCR扩增。如果用针对甲基化DNA链的引物能扩增出片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明该位点不存在甲基化。