双荧光素酶报告基因检测实验服务

双荧光素酶报告基因检测实验服务是一种广泛应用于分子生物学研究的专业技术服务，主要用于基因表达调控、miRNA靶基因验证、启动子活性分析等领域
。以下是该服务的核心内容和技术要点：

一、服务内容

1. ‌miRNA靶基因验证‌

• 将预测的mRNA/lncRNA靶序列插入报告基因载体，通过荧光素酶活性变化验证miRNA的靶向作用

• 常用载体：psiCHECK2（R-Luc 3'UTR插入靶序列，F-Luc作内参）

2. ‌启动子活性分析‌

• 通过截短或突变启动子区域（通常2kb片段），检测荧光素酶活性变化以确定功能区域

• 常用载体：pGL3-Basic（F-Luc上游插入启动子）

3. ‌转录因子调控验证‌

• 共转染转录因子表达载体与启动子报告载体，通过活性变化分析调控关系

4. ‌ceRNA机制研究‌

• 验证lncRNA/circRNA通过竞争miRNA调控靶基因的表达

二、实验流程

1. ‌载体构建‌：将目标序列（如启动子、UTR等）克隆至报告载体

2. ‌细胞转染‌：使用高效转染试剂（如LipoFiter）或病毒系统

3. ‌双荧光检测‌：

• 裂解细胞后，依次加入LARII（测F-Luc活性）和STOP&GLO Reagent（测R-Luc活性）

4. ‌数据分析‌：以F-Luc/R-Luc比值校正转染效率，计算相对活性

三、服务优势

• ‌专业预测支持‌：部分提供商免费提供实验前的结合位点预测服务

• ‌定制化方案‌：可针对不同样本定制质粒或miRNA mimics

• ‌高灵敏度检测‌：采用均质法辉光型试剂盒（如Promega），减少操作误差

四、应用案例

• ‌案例1‌：验证某miRNA抑制靶基因表达，荧光素酶活性下降50%以上

• ‌案例2‌：发现转录因子X通过结合启动子Y的-500bp区域增强表达

五、注意事项

• 实验需设置背景对照、阴性对照及阳性对照

• 推荐使用底部透明的96孔板以避免转板误差