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细胞钙离子检测实验

简要描述：细胞钙离子检测实验是伊莱博生物的基础服务项目之一，由经验丰富的实验人员操作完成。

  • 更新时间：2025-05-14
  • 厂商性质：代理商
  • 访  问  量：1014
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详细介绍

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常用检测方法

1. 荧光探针法

  • ‌原理‌：使用钙离子敏感荧光探针(如Fluo-3、Fluo-4)与Ca²⁺结合后产生荧光信号变化

  • ‌操作流程‌：

    1. 探针负载：将细胞与荧光探针共孵育(通常30-60分钟)

    2. 洗涤去除多余探针

    3. 实时监测荧光强度变化(激发/发射波长约488/525nm)

  • ‌优势‌：灵敏度高、可实时动态监测

2. 流式细胞术

  • ‌应用‌：高通量分析群体细胞Ca²⁺浓度分布

  • ‌特点‌：

    • 结合荧光探针使用

    • 可同时检测其他参数(如细胞周期)

3. 共聚焦显微镜技术

  • ‌优势‌：亚细胞分辨率，可定位Ca²⁺信号空间分布

  • ‌应用‌：研究局部钙信号(如突触小体钙震荡)

实验设计要点

样本制备

  • ‌细胞状态‌：建议使用对数生长期细胞(70-80%融合度)

  • ‌对照设置‌：

    • 阴性对照(无探针组)

    • 阳性对照(钙离子载体处理组)

参数优化

  • ‌探针浓度‌：避免过度负载导致的细胞毒性

  • ‌检测时间‌：根据信号动态范围确定(通常5-30分钟)

  • ‌温度控制‌：维持37℃恒温环境

数据分析

信号处理

  • ‌基线校正‌：扣除背景荧光

  • ‌标准化表达‌：ΔF/F₀=(F-F₀)/F₀

  • ‌动力学参数‌：

    • 峰值幅度

    • 上升/下降时间常数

注意事项

  1. ‌避光操作‌：荧光探针易光漂白

  2. ‌钙缓冲系统‌：控制胞外Ca²⁺浓度

  3. ‌多参数验证‌：建议结合电生理或分子生物学方法

  4. ‌设备校准‌：定期进行荧光强度标定



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