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AO/EB染色实验是一种通过荧光染料区分细胞存活状态的经典方法,主要用于细胞凋亡与坏死的鉴别
。以下是实验关键信息:
染料特性
AO(吖啶橙):穿透完整细胞膜,与DNA结合发绿色荧光,与RNA结合发红色荧光
EB(溴化乙锭):仅进入膜损伤细胞,与DNA结合发橘红色荧光
染色结果判读
细胞处理
诱导凋亡后消化细胞,制备1×10⁷/mL单细胞悬液
染色操作
取25μL细胞悬液,加入2μL AO(100μg/mL)和2μL EB(100μg/mL)
混匀后滴片,加盖玻片避光孵育1分钟
观察记录
荧光显微镜下20分钟内计数500个细胞(蓝光激发绿荧光,绿光激发红荧光)
染色控制
AO/EB终浓度建议50μg/mL,避免过度染色
需设置未处理细胞对照和凋亡诱导阳性对照
结果分析
早期凋亡需与活细胞区分:观察核固缩形态
坏死细胞表现为细胞体积增大和荧光弥散
肝癌细胞凋亡检测中,AO/EB染色与TUNEL法结果一致性较高
骨肉瘤细胞凋亡研究中,该方法可定量分析不同凋亡阶段细胞比例
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