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细胞AO/EB 染色实验

简要描述：细胞AO/EB 染色实验是伊莱博生物的基础服务项目之一，由经验丰富的实验人员操作完成。

  • 更新时间：2025-05-19
  • 厂商性质：代理商
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AO/EB染色实验是一种通过荧光染料区分细胞存活状态的经典方法，主要用于细胞凋亡与坏死的鉴别
。以下是实验关键信息：

一、实验原理

  1. ‌染料特性‌

    • ‌AO（吖啶橙）‌：穿透完整细胞膜，与DNA结合发绿色荧光，与RNA结合发红色荧光

    • ‌EB（溴化乙锭）‌：仅进入膜损伤细胞，与DNA结合发橘红色荧光

  2. ‌染色结果判读‌

    细胞状态核染色特征荧光颜色
    正常活细胞均匀绿色黄绿色（核）/红色（胞质）
    早期凋亡细胞核固缩呈串珠状或块状绿色荧光亢进
    晚期凋亡细胞核碎裂或凋亡小体橙红色
    坏死细胞细胞肿胀，核轮廓模糊不均匀橙红色

二、实验步骤（以贴壁细胞为例）

  1. ‌细胞处理‌

    • 诱导凋亡后消化细胞，制备1×10⁷/mL单细胞悬液

  2. ‌染色操作‌

    • 取25μL细胞悬液，加入2μL AO（100μg/mL）和2μL EB（100μg/mL）

    • 混匀后滴片，加盖玻片避光孵育1分钟

  3. ‌观察记录‌

    • 荧光显微镜下20分钟内计数500个细胞（蓝光激发绿荧光，绿光激发红荧光）

三、注意事项

  1. ‌染色控制‌

    • AO/EB终浓度建议50μg/mL，避免过度染色

    • 需设置未处理细胞对照和凋亡诱导阳性对照

  2. ‌结果分析‌

    • 早期凋亡需与活细胞区分：观察核固缩形态

    • 坏死细胞表现为细胞体积增大和荧光弥散

四、应用案例

  • 肝癌细胞凋亡检测中，AO/EB染色与TUNEL法结果一致性较高

  • 骨肉瘤细胞凋亡研究中，该方法可定量分析不同凋亡阶段细胞比例




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