小鼠肾脏HE染色实验服务

小鼠肾脏HE染色实验服务

小鼠肾脏HE染色实验服务

一、实验前准备

主要试剂与仪器

• ‌固定液‌：4%多聚甲醛或10%中性福尔马林

• ‌染色液‌：Harris苏木素、0.5%伊红Y

• ‌梯度酒精‌：70%-100%乙醇系列

• ‌设备‌：石蜡切片机、光学显微镜

二、实验操作流程

1. 取材与固定

• 沿肾门纵切肾脏为两半

• 4%多聚甲醛固定24-30小时

• 流水冲洗1小时去除固定液

2. 脱水与透明

• 梯度脱水：

• 30%→50%酒精各2小时

• 75%酒精过夜

• 80%→100%乙醇各2小时

• 透明处理：

• 50%乙醇+50%二甲苯20分钟

• 纯二甲苯Ⅰ/Ⅱ各20分钟

3. 浸蜡与包埋

• 石蜡浸渍：

• 蜡Ⅰ30分钟

• 蜡Ⅱ40分钟

• 蜡Ⅲ1小时

• 石蜡包埋定型

4. 切片制备

• 切片厚度4-5μm

• 60℃烘片至蜡融化

• 多聚赖氨酸(PLL)包被载玻片防脱片

5. HE染色步骤

1. ‌脱蜡复水‌：

• 二甲苯Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ各15分钟

• 100%→70%乙醇梯度(每级5分钟)

• 蒸馏水冲洗

2. ‌核染色‌：

• 苏木素染色15秒-6分钟(根据染色液浓度调整)

• 流水冲洗10分钟

• 1%盐酸乙醇分化1-4秒

• 温水反蓝10分钟

3. ‌胞质染色‌：

• 伊红染色3-25秒

• 快速涮洗去除多余染料

4. ‌脱水封片‌：

• 梯度酒精脱水

• 二甲苯透明

• 中性树胶封固

三、结果判读与问题排查

正常染色特征

• ‌肾小球‌：蓝紫色细胞核，粉红色基质

• ‌肾小管‌：清晰的上皮细胞边界

• ‌间质‌：染色均匀无沉淀

常见问题与解决

1. ‌染色过深‌：

• 苏木素：增加盐酸乙醇分化时间

• 伊红：70%乙醇脱色

2. ‌染色不均‌：

• 检查脱水是否干净

• 确保染色液新鲜无沉淀

3. ‌组织脱落‌：

• 加强载玻片包被处理

• 缩短烤片时间

四、应用实例

在IgA肾病模型中，HE染色可显示：

• 系膜细胞增生

• 肾小球系膜区增宽

• 基底膜增厚