小鼠脑组织HE染色实验服务

小鼠脑组织HE染色实验服务

小鼠脑组织HE染色实验完整流程

HE染色(苏木精-伊红染色)是观察脑组织形态学结构的经典方法
。以下是详细实验步骤：

一、实验前准备

主要试剂与仪器

• ‌固定液‌：4%多聚甲醛或10%中性福尔马林

• ‌染色液‌：Harris苏木素、0.5%伊红Y

• ‌梯度酒精‌：70%-100%乙醇系列

• ‌设备‌：石蜡切片机、光学显微镜

二、实验操作流程

1. 标本采集与固定

• 麻醉后心脏灌注(生理盐水→4%多聚甲醛)

• 完整取出脑组织，10%甲醛固定24-48小时

2. 石蜡包埋

• 梯度脱水：70%→100%乙醇(每级45-90分钟)

• 透明处理：二甲苯Ⅰ/Ⅱ各30分钟

• 浸蜡与包埋：60℃石蜡浸渍1.5-2小时

3. 切片制备

• 冠状切片(厚度4μm)，42℃温水展片

• 37℃烘箱过夜防脱片

4. HE染色步骤

1. ‌脱蜡复水‌：

• 二甲苯Ⅰ/Ⅱ各12分钟

• 100%→70%乙醇梯度(每级3分钟)

• 蒸馏水冲洗

2. ‌染色‌：

• 苏木素染核13分钟

• 流水冲洗3分钟

• 温水反蓝10分钟

• 伊红染胞质15秒

3. ‌脱水透明‌：

• 梯度酒精脱水

• 二甲苯透明

4. ‌封片‌：

• 中性树胶封固

• 50℃烘箱干燥20分钟

三、结果判读

• ‌细胞核‌：蓝紫色(苏木素着色)

• ‌细胞质‌：粉红色(伊红着色)

• ‌特殊结构‌：海马区神经元分层清晰可见

四、注意事项

1. ‌防脱片处理‌：载玻片需经多聚赖氨酸(PLL)涂层

2. ‌染色控制‌：苏木素染色过深可用盐酸酒精分色

3. ‌质量控制‌：需设置正常脑组织对照

4. ‌应用分析‌：可结合免疫组化验证特定蛋白表达