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通过机械划痕在单层肿瘤细胞上制造无细胞区域，观察边缘细胞向空白区迁移的能力，模拟体内肿瘤转移过程
。
细胞铺板
使用6孔板，接种密度为5×10⁵个细胞/孔（具体依细胞类型调整），过夜培养至90%融合度
。
铺板后轻拍培养板两侧（非四边）使细胞分布均匀
。
划痕制作
用灭菌200μL枪头或牙签垂直接触板底，匀速划出直线（可借助直尺对齐）
。
每孔划1-3道，划痕宽度建议500μm（Culture Insert法可标准化宽度）
。
清洗与培养
PBS轻柔冲洗3次去除脱落细胞，换用含1-2% FBS的培养基抑制增殖干扰
。
加入丝烈霉素（4μg/mL）可进一步阻断增殖，纯化迁移效应
。
图像采集与分析
时间点：0h、12h、24h（依细胞迁移速度调整）
。
定位标记：提前用Marker笔在板底画网格线确保同一视野
。
量化方法：
迁移率 = (初始宽度 - 终点宽度) / 初始宽度 ×100%。
细胞状态
选择高活力（>95%）且低自发凋亡的肿瘤细胞系
。
避免过度消化，吹打时使用含血清培养基终止反应
。
划痕一致性
枪头需垂直板底，压力均匀，多孔实验建议同一人操作
。
预实验确定最佳划痕宽度（过窄易愈合，过宽难迁移）
。
干扰控制
排除增殖影响：低血清培养基或丝裂烈素处理
。
温度稳定：操作全程在37℃恒温台进行，减少热应激
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