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免疫沉淀实验技术服务

简要描述:免疫沉淀法是一种研究蛋白质间交互作用的生物技术,这种技术是将蛋白质 视为抗原,并利用抗体与之进行特异性结合的特性,来进行研究。上海伊莱博致力于临床前药效学CRO实验,多年的免疫沉淀实验技术服务的经验,为广大药效学实验提供保障。

  • 更新时间:2022-12-21
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:58

详细介绍

详细信息:

1.  表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后,再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核,然后将所得上清在10000 g 离心1 min。

 2.  一次性对上清进行预处理,每200 μl 上清加入10 μl 活化后被淬灭的琼脂糖对照。在旋转揺床中室温揺荡2 h 或在4℃过夜。200 g 离心1 min,保留上清。

 3.  在1.5 ml 的微量离心管中加满裂解液室温作用10 min,对其进行预包被。吸去液体后,加入105~106 cpm 的含抗原的放射性标记上清,加稀释缓冲液使终体积为200 μl。 

4.  加入10 μl 1:1的抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。4℃在旋转摇床中摇荡1. 5~3 h,一直保持Sepharose呈混悬状。

5.  Sepharose偶联物依次用1 ml 下面列出的缓冲液洗涤。毎次洗完后,200 g 离心5 min 或微量离心5 s。以细头的巴斯德吸管小心吸去上清,仅在沉淀的上面留10 μl 的液体。在第4次洗涤后,离心甩下管壁所有残余液滴并将其吸去,沉淀上仅留下约 10 μl。

6.   加入20~50 μl SDS样品缓冲液。由于样品缓冲液比重大于洗涤缓冲液,它可渗透到Sepharose中,不要用旋涡混合器旋起SEpharose,以免使之粘附在缓冲液液面以上的管壁。盖紧盖子,于100℃保温5 min。

7.  用旋涡混合器混匀,200 g 离心或微量离心5 s。将上清加样于凝胶以SDS-PAGE分析,使用增感屏进行放射自显影或荧光自显影或检测标记蛋白质。

伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队,核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构,能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。

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