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免疫共沉淀实验步骤:
1.试剂准备,样品收集
2.免疫沉淀反应后,在进行电泳
3.通过免疫共沉淀确定结合蛋白
免疫共沉淀:是一种利用抗原抗体相互作用的免疫学原理来研究蛋白质相互作用的经典实验方法,它可以确定两种蛋白在完整细
胞内生理条件下是否存在相互作用。
细胞用温和非变性裂解液裂解,离心取上清
加入Protein A/G 磁珠预清除非特异性结合
加入目标蛋白一抗或 IgG 对照,4℃ 孵育过夜
加入 Protein A/G 磁珠,4℃ 结合 2–4 h
洗涤磁珠,去除杂蛋白
煮沸洗脱,进行 Western blot 检测互作蛋白
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