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细胞周期检测技术服务

简要描述:细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分烈期两个阶段。上海伊莱博致力于临床前药效学CRO实验,多年的细胞周期检测技术服务的经验,为广大药效学实验提供保障。

  • 更新时间:2022-12-21
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:62

详细介绍

细胞周期检测实验步骤

实验共分以下4个主要步骤:

1.细胞铺盘

HeLa S3细胞,密度为80%左右分盘 ,使铺盘密度在50%左右,为满足流式细胞仪上机要求,细胞数目需大于1x10°/组。

2.细胞同步化处理 :

a) 加入终浓度2mM的Thymidine同步化18h

b) 用温育的PBS洗4次,更换新鲜培养基,培养9h

c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.样品收集;

a) 分别收取释放2h(S期),6h(G2/M期)和12h(G1期)细胞样品

b) 每个样品收取都使用预冷的PBS洗涤4次,1000g离心5min,弃上清

C)100ULPBS审悬沉促,吸取出细胞悬液干移液器中,干移去细胞的管中加入900uL预冷的70%一醇,漩涡振荡器需荡中滴入细胞悬液。

d)4℃固定一小时或更长时间。

e)1500rmp,离心10min,去固定液。

f)细胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液浓度1mg/mL,工作浓度20ug/mL;PI母液浓度2.5mg/mL,工作浓度50ug/mL。

g)细胞37度染色1h。根据细胞量,加入一定体积的细胞染色液(1~1.5mL)重悬,使上机时细胞通过率为200~350Cell/s,染色液不可过多或过少,过多则细胞密度过低上机速度严重不足,过少则导致细胞粘结。

h) 300目筛网过滤至流式管中。

4.上机检测;

流式细胞仪上机检测,计数50000个细胞。

5.同步化数据分析

数据使用ModFit软件分析。


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