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免疫荧光染色服务一、制片
选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙.氧.基.乙.烷等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。
免疫荧光染色服务二、固定
除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。
三、水洗
固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡冲洗，最后以蒸馏水冲洗，防止自发性荧光。
四、染色
染色分直接染色法与间接染色法。
1. 材料与试剂
(1)荧光抗体，稀释至应用浓度。
(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液
(3)9份优质甘油加1份pH7.4PBS液即为甘油缓冲液。甘油有减少非特异性荧光的作用。
(4)带盖方盘
2.直接染色法
(1)将固定好的玻片置于湿盘中，滴加荧光抗体染色液，以覆盖为度，加盖，37℃感做30min~45min,
(2)PBS冲洗3次，每次冲洗3 min，即3x3冲洗。
(3)蒸馏水冲洗。
(4)滴甘油缓冲液一滴，封片，荧光显微镜检查。
3. 间接染色法
(1)检查抗原:
①取固定标本，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min。
②以PBS液3x3冲洗。
③再加荧光标记的抗抗体，37℃孵育30 min。
④PBS 3x3冲洗。
⑤H2O冲洗，凉干。
⑥加甘油缓冲液，封片、镜检。
(2)检查抗体:
①免疫后动物的淋巴组织涂片，自然干燥，甲醇固定。
②滴加相应抗原液(按1:100~1:500稀释)，37℃孵育30 min。
③PBS液3x3冲洗。
④加荧光抗体，37℃孵育30 min。
⑤PBS液3x3冲洗。
⑥水洗，凉干。
⑦加甘油缓冲液，封片、镜检。
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