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Edu染色服务:实验步骤
1.将处于对数生长期的各实验组细胞**消化后,培养基重悬成细胞悬液,并计数。
2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度,每组3-5重复,根据实验设计决定铺板数量。
3.统一铺好后,待细胞沉淀下来后,在显微镜下观察各实验组的细胞密度,如果密度不均匀,则固定一组,微调其他组细胞的量再次铺板(如:发现NC组细胞较多,降低细胞量再次铺板),放入细胞培养箱中培养。
4.铺板后第一天与第四天,配制2X(20uM)的EDU工作液,将37℃预热的2X的EDU工作液等体积加入96孔板中,是EDU终浓度变为1X,继续孵育细胞2小时,EDU标记细胞完成后,去除培养液,并加入1mL固定液,室温固定15分钟,去除固定液,每孔用1mL洗涤液洗涤细胞3次,每次3-5分钟,去除洗涤液,每孔用1mL通透液,室温孵育10-15分钟,去除通透液,每孔用1mL洗涤液洗涤细细胞1-2次,每次3-5分钟。用内源性过氧化物酶封闭液室温孵育20分钟,用洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。
5.EDU检测:每孔加入50uL的Click反应液,室温避光孵育30分钟,吸出反应液,用洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。
6.样品的显色 :在样品上加Streptavidin-HRP工作液,室温孵育30分钟。 用洗涤液洗涤3次,每次2分钟。加入0.1ml TMB显色液,室温孵育5-30分钟或根据显色情况孵育适当时间。直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入25微升2M 终止反应,随后在450nm测定吸光度。
Edu染色服务
伊莱博生物科技(上海)有限公司,公司总部位于上海长江软件园。2022年1月与上海交通大学药学院成立联合研究中心,主要以生命科学研究为基础,专注于研究成果转化及技术服务创新,建立了包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及动物实验等学科的研究服务体系,为医学领域的发展做出了重要贡献。
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