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Edu染色服务

简要描述:EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,它们能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶渗入正在复制的DNA分子,然后分别利用免疫荧光技术、与Apollo荧光染料特异性反应检测细胞增殖情况。这是一种新型的非放射性同位素细胞增殖检测的方法,在细胞培养,实体组织及临床研究中得到了广泛的应用。上海伊莱博致力于临床前药效学CRO实验,有着多年的Edu染色服务的经验。

  • 更新时间:2022-12-27
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:58

详细介绍

三、实验步骤

1.将处于对数生长期的各实验组细胞**消化后,培养基重悬成细胞悬液,并计数。

2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度,每组3-5重复,根据实验设计决定铺板数量。

3.统一铺好后,待细胞沉淀下来后,在显微镜下观察各实验组的细胞密度,如果密度不均匀,则固定一组,微调其他组细胞的量再次铺板(如:发现NC组细胞较多,降低细胞量再次铺板),放入细胞培养箱中培养。

4.铺板后第一天与第四天,配制2X(20uM)的EDU工作液,将37℃预热的2X的EDU工作液等体积加入96孔板中,是EDU终浓度变为1X,继续孵育细胞2小时,EDU标记细胞完成后,去除培养液,并加入1mL固定液,室温固定15分钟,去除固定液,每孔用1mL洗涤液洗涤细胞3次,每次3-5分钟,去除洗涤液,每孔用1mL通透液,室温孵育10-15分钟,去除通透液,每孔用1mL洗涤液洗涤细细胞1-2次,每次3-5分钟。用内源性过氧化物酶封闭液室温孵育20分钟,用洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。

5.EDU检测:每孔加入50uL的Click反应液,室温避光孵育30分钟,吸出反应液,用洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。

6.样品的显色 :在样品上加Streptavidin-HRP工作液,室温孵育30分钟。 用洗涤液洗涤3次,每次2分钟。加入0.1ml TMB显色液,室温孵育5-30分钟或根据显色情况孵育适当时间。直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入25微升2M 终止反应,随后在450nm测定吸光度。


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