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银染法实验技术服务

简要描述:银染法是一种用于检测蛋白质或核酸的生物化学技术,其基本原理涉及银离子的化学反应。

  • 更新时间:2024-06-17
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详细介绍

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银染法是一种用于检测蛋白质或核酸的生物化学技术,其基本原理涉及银离子的化学反应。以下是银染法原理的详细介绍:

· 银染法中,银离子与DNA或蛋白质结合。

· 在碱性pH环境下,还原剂如甲醛将银离子还原成金属银,这些银颗粒沉淀在蛋白质或DNA的表面上,从而显色。

· 由于银染具有很高的灵敏度,它能够检测到凝胶上低于1ng/蛋白质点的物质,因此广泛应用于2D凝胶分析和极低蛋白含量的测定中。

此外,银染中的蛋白质吸光度与浓度之间的关系可用于研究蛋白质的某些特殊基团,如含硫氨基酸在银染中的作用表明,不含或只含少量gas残基的蛋白质有时会呈现负染。

银染法实验步骤如下:

1. 固定:将凝胶放入约100ml固定液中,室温摇动20分钟或40分钟以上甚至过夜。

2. 洗涤:弃去固定液,加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇,室温摇动10分钟。

3. 增敏:加入100ml银染增敏液(1X)或100ml银溶液(1X),室温摇动2分钟。

4. 洗涤:弃去增敏液,加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水,室温摇动10分钟。

5. 显色:加入100ml银溶液(1X)或显色液,室温摇动10分钟。

6. 洗涤:弃去显色液,加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水,室温摇动1-1.5分钟。

7. 显影:根据显色结果,使用显影液进行显影,直至看到目的蛋白带



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