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质粒转化

简要描述:将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化( Transformation )。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备,见前)。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面,经 42℃ 短时间热冲击处理,促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分lie增殖。被转化的细菌中,外源基因得到表达。在

  • 更新时间:2024-03-08
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将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化( Transformation )。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备,见前)。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面,经 42℃ 短时间热冲击处理,促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分lie增殖。被转化的细菌中,外源基因得到表达。在选择性培养平板上,可选出所需的转化子(即含有质粒 DNA 的细菌)。钙处理的感受态细胞,一般每微克 DNA 能获得 10 5 ~ 10 6 个转化子。除化学方法转化细菌外,还有电穿孔法( Electroporation ),其转化率可高达 10 9 ~ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。

 

二、实验器材

1.培养皿 

2.恒温培养箱

 

三、试剂

1.LB 培养基

2.选择性 LB 琼脂培养平板(含氨苄qms,终浓度为 50μg/ml )

3.氨苄qms 100 mg/ml

4.宿主细菌:经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α

 

四、操作步骤

1、取50μL大肠杆菌感受态细胞,加入适量质粒(体积不得超过4μL)冰浴30min后42℃热激90s ,马上放回冰上,冰浴2min ;

2、加400μLLB培养基,于37℃摇床慢摇振荡培养45-60min;

3、取50-100μL涂在含有氨苄qms(100μg/mL)的LB固体培养基上,37℃倒置培养过夜。


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