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流式双标实验

简要描述：流式双标实验是伊莱博生物细胞平台较为成熟的实验技术服务之一，由本公司经验丰富的实验人员操作完成。

  • 更新时间：2026-03-20
  • 厂商性质：代理商
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流式双标实验是伊莱博生物细胞平台较为成熟的实验技术服务之一，由本公司经验丰富的实验人员操作完成。

一、什么是流式双标

同时检测2 个表面抗原，用来区分细胞亚群
常用组合举例：

  • CD3/CD4 → 总 T 细胞、CD4+T

  • CD3/CD8 → 总 T 细胞、CD8+T

  • CD4/CD25 → Treg

  • F4/80/CD11b → 巨噬细胞

  • CD11c/MHC-II → 树突状细胞

  • IL-4/IFN-γ → Th1/Th2（胞内染色）

二、实验材料

  • 单细胞悬液（脾细胞、PBMC、BALF、组织消化）

  • 流式抗体：FITC/PE/APC/PerCP 任意两种不同荧光

  • 流式染色缓冲液（PBS+1% FBS/BSA）

  • 红细胞裂解液（血 / 脾样本必需）

  • 96 孔 U 型板 / 流式管

  • 流式细胞仪

三、标准操作步骤（表面双标）

1. 细胞制备

  1. 组织研磨 → 200 目滤网过滤

  2. 离心 1200 rpm × 5 min

  3. 加红细胞裂解液，室温裂解 5 min

  4. 终止裂解，洗涤 2 次

  5. 调整细胞浓度：1×10⁶ / 管

2. 封闭 Fc 受体（关键，减少非特异）

  • 加 CD16/32 封闭抗体

  • 4℃ 10 min

3. 双荧光抗体染色

  • 每管加入 两种荧光抗体（按说明书体积）

  • 轻轻混匀，4℃避光孵育 20 min

4. 洗涤

  • 加染色缓冲液，离心弃上清

  • 重复 1～2 次

5. 重悬上机

  • 200～400 μL 重悬，上机检测






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