流式检测细胞内钙离子浓度

简要描述：流式细胞术测量钙离子的荧光探针大都是钙螯合剂EDTA的衍生物，有较高的量子产量，并对钙有较高的特异性亲合力。钙离子流式荧光探针本身不能透过细胞质膜进入细胞内，将它们连洁乙酰甲酯后，可将染料导入细胞，经细胞内的非特异性酯酶水解水解该酯键，释放出染料分子，恢复为不能通过细胞膜的游离酸形式，进而与细胞内钙结合。通过荧光强度可以敏感地检测出钙离子浓度。

更新时间：2024-03-14
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1.Fluo/Am储存液配制：将Fluo/Am溶于DMSO，配成终浓度为2mmol/L的储存液，分装，-70度冻存。
2.悬浮细胞染色：收集细胞并调整细胞浓度至2*10^6个/ml，加Fluo/Am至终浓度为5-10umol/L,置于，5%CO2。37度避光，孵育30-60min，其间轻轻振荡几次，并设置阴性对照（不加Fluo/Am）。
3.贴壁细胞染色：以5*10^5个细胞种植于24孔培养板中，置于5%CO2。37度培养一段时间，加入Fluo/Am至终浓度为5-10umol/L，置于5%CO2。37度避光，孵育30-60min。其间轻轻振荡几次，并设置阴性对照。
4.取出细胞或消化细胞，离心1500r/min 10min，去除多余染料，再用无钙缓冲液冲洗PBS反复离心洗涤2次，最后用无钙PBS重悬至0.5ml。
5.进行流式检测分析
结果分析：用488mm激发，FLI-H荧光通道收集荧光信号，收集1*10^4个细胞，细胞内钙的浓度用平均荧光表示。