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流式检测细胞内钙离子浓度

简要描述:流式细胞术测量钙离子的荧光探针大都是钙螯合剂EDTA的衍生物,有较高的量子产量,并对钙有较高的特异性亲合力。钙离子流式荧光探针本身不能透过细胞质膜进入细胞内,将它们连洁乙酰甲酯后,可将染料导入细胞,经细胞内的非特异性酯酶水解水解该酯键,释放出染料分子,恢复为不能通过细胞膜的游离酸形式,进而与细胞内钙结合。通过荧光强度可以敏感地检测出钙离子浓度。

  • 更新时间:2024-03-14
  • 厂商性质:代理商
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详细介绍

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1.Fluo/Am储存液配制:将Fluo/Am溶于DMSO,配成终浓度为2mmol/L的储存液,分装,-70度冻存。
2.悬浮细胞染色:收集细胞并调整细胞浓度至2*10^6个/ml,加Fluo/Am至终浓度为5-10umol/L,置于,5%CO2。37度避光,孵育30-60min,其间轻轻振荡几次,并设置阴性对照(不加Fluo/Am)。
3.贴壁细胞染色:以5*10^5个细胞种植于24孔培养板中,置于5%CO2。37度培养一段时间,加入Fluo/Am至终浓度为5-10umol/L,置于5%CO2。37度避光,孵育30-60min。其间轻轻振荡几次,并设置阴性对照。
4.取出细胞或消化细胞,离心1500r/min 10min,去除多余染料,再用无钙缓冲液冲洗PBS反复离心洗涤2次,最后用无钙PBS重悬至0.5ml。
5.进行流式检测分析
结果分析:用488mm激发,FLI-H荧光通道收集荧光信号,收集1*10^4个细胞,细胞内钙的浓度用平均荧光表示。


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