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平板细胞克隆实验

简要描述:当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。平板细胞克隆适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞可用于(1)细胞增殖实验(2)细胞群体依赖性检测

  • 更新时间:2024-03-14
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克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

1.取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%ydbm消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2.将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2——3周。

3.经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10——30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。

4. 将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。


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