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RNA-seq实验

简要描述:RNA-seq实验,也叫转录组测序技术,就是把mRNA,smallRNA,and NONcoding RNA等等,其中一些用高通量测序技术把它们的序列测出来,以此来检测它们的表达水平。

  • 更新时间:2024-05-06
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RNA-seq实验原理及过程

转录组是某个物种或者特定细胞类型产生的所有转录本的集合。转录组研究能够从整体水平研究基因功能以及基因结构,揭示特定生物学过程以及**发生过程中的分子机理。

 

先将样品提取总RNA,在这之后,除去rRNA(对于真核生物,用带有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA,对于原核生物,用试剂盒去除rRNA),向得到的mRNA中加入Fragmentation Buffer使其片断成为短片段,再以片断后的mRNA为模板,用六碱基随机引物(random hexamers)合成cDNA**链,并加入缓冲液、dNTPs、RNase H 和DNA polymerase I 合成cDNA第二链,经过QiaQuick PCR试剂盒纯化并加 EB缓冲液洗脱经末端修复、加碱基A,加测序接头,再经琼脂糖凝胶电泳回收目的大小片段,并进行PCR扩增,从而完成整个文库制备工作,构建好的文库用Illumina HiSeq2000进行测序。


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