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免疫荧光实验服务

简要描述:免疫荧光实验服务(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

  • 更新时间:2022-08-15
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:817

详细介绍

品牌自营品牌产地类别国产
应用领域医疗卫生,化工,生物产业

  一、服务介绍

  免疫荧光实验服务:细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。

  二、实验原理

  将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

  三、实验流程

  免疫荧光实验服务单标记方法

  单标记是指只标记一种蛋白质分子,方法比较简单,只要按照染色步骤去做,通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择,固定液选择的合适与否,可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。

  1、所需材料与试剂

  a,培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。

  b,一抗、FITC或TRITC标记的二抗。

  c,4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液(-20℃预冷20min)。

  d,封闭液。

  e,0.01mol/LPBS缓冲液。

  2、染色方法

  a,取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿,用0.01MPBS洗2-3遍。

  b,加入0.3%的Tritonx-100,37℃,30rain

  c,加入4%多聚甲醛试问固定30min或冷丙酮4℃固定10min。

  d,正常阻断血清1:20封闭试问20-30min,抑制IgG的非特异性结合。阻断血清选择与二抗同一种属的正常血清。

  e,去掉正常血清,直接加入一抗,37℃孵育1h或4℃过夜。抗体以0.01mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。

  f,0.3%TritonX-100洗5min,0.01mol/IPBS洗5min,0.3%TritonX5min,0.01MPBS洗5rain。

  g,加入FITC-二抗或TRITC-二抗,37℃,孵育1h。

  h,0.3%TritonX-100洗5rain,0.01mol/LPBS洗5min,0.3%TritonX5min,0.01mol/LPBS洗5min,用滤纸吸干。

  i,90%甘油(PBS配制)封片。

  j,激光扫描共焦显微镜下观察,或于4℃避光保存。

  双标记方法:是指同时标记细胞内两种蛋白质分子,当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些,应注意所用的一抗是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如:A抗体为多克隆抗体,来自家兔;B抗体为单克隆抗体,来自小鼠)。其次,两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠,且尽量远离,通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下,染色时两种一抗可以同时孵育,然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱,而另一种颜色比较强时,应考虑先孵育颜色较弱的二抗。其他步骤同免疫荧光单标记。

  四、客户提供

  细胞株或细胞爬片。注:细胞爬片不宜太密;细胞固定。组织切片,一抗

  五、公司提供

  基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析,荧光显微镜或共聚焦显微镜拍摄

  实验周期:1-3周


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