全国服务咨询热线:

15221734409

Products产品中心
首页 > 产品中心 > 实验服务 > 细胞实验检测服务 > 细胞增殖-Brdu流式实验

细胞增殖-Brdu流式实验

简要描述:细胞增殖-Brdu流式实验是伊莱博生物的基础服务项目之一,由专业的实验人员操作完成。

  • 更新时间:2025-05-14
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:1050

详细介绍

品牌其他品牌应用领域医疗卫生,生物产业

实验原理

BrdU是胸腺嘧啶核苷类似物,在细胞DNA合成期(S期)可竞争性掺入新合成的DNA链。通过荧光标记的抗BrdU抗体与流式细胞术结合,可精确定量处于增殖期的细胞比例

实验材料

  • 细胞样本‌:对数生长期细胞(推荐密度70-80%融合)

  • 主要试剂‌:

    • BrdU储存液(10mM,溶于PBS)

    • 抗BrdU-FITC/Percp抗体

    • DNA酶/盐酸处理液

    • 7-AAD或PI染色液(用于细胞周期分析)

  • 仪器设备‌:流式细胞仪、离心机、CO₂培养箱

实验步骤

细胞标记

  1. 向培养体系加入BrdU终浓度10μM,37℃孵育30分钟至2小时

  2. 消化收集细胞,PBS洗涤2次

细胞固定与透化

  1. 70%冷乙醇4℃固定30分钟

  2. 2M HCl室温处理30分钟(暴露BrdU抗原位点)

  3. 0.1M硼酸钠缓冲液(pH8.5)中和

抗体染色

  1. 抗BrdU一抗(1:100稀释)室温孵育1小时

  2. PBS洗涤后加荧光二抗(避光孵育30分钟)

  3. 可选:加入7-AAD(5μg/mL)共染DNA

流式检测

  1. 上机前用40μm滤膜过滤

  2. 流式细胞仪设置:

    • FITC通道检测BrdU(Ex 488nm/Em 530nm)

    • PerCP通道检测7-AAD(Ex 488nm/Em 670nm)

  3. 采集10,000个以上细胞事件

数据分析

  • 双参数分析‌:BrdU+ vs DNA含量(7-AAD),区分G0/G1、S、G2/M期细胞

  • 增殖指数计算‌:(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%

  • 注意事项‌:

    • 设门排除细胞碎片

    • 同型对照设定阴性阈值

技术优势

  • 高灵敏度:可检测<1%的增殖细胞

  • 多参数分析:结合细胞周期和表型标记

  • 动态追踪:通过脉冲-追踪实验研究增殖动力学

常见问题解决

  • 背景高‌:延长封闭时间,优化抗体浓度

  • 信号弱‌:增加BrdU孵育时间至4小时

  • 细胞聚集‌:减少固定时间,增加DNA酶处理




产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
伊莱博生物科技(上海)有限公司
地址:上海市宝山区长江南路180号B区650室
邮箱:yilaibo@shyilaibo.com
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息