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透射电镜观察细胞形态实验

简要描述:透射电镜观察细胞形态实验是伊莱博生物可提供的服务项目之一,有专业的实验人员操作完成。

  • 更新时间:2025-05-14
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:2483

详细介绍

品牌其他品牌应用领域医疗卫生,生物产业

实验原理

透射电子显微镜(TEM)利用高能电子束穿透超薄样品,通过电磁透镜成像系统放大观察细胞超微结构
。其分辨率可达0.1-0.2nm,能清晰显示细胞膜、细胞器、染色质等亚显微结构

关键实验步骤

样品前处理

  1. 细胞固定‌:

    • 2.5%戊二醛(0.1M PBS配制)4℃初固定2-4小时

    • 1%锇酸后固定1-2小时(需避光操作)

  2. 脱水处理

    • 梯度乙醇(50%-100%)逐级脱水

    • 环氧丙烷作为中间过渡溶剂

包埋与切片

  1. 包埋剂配制‌:

    • 环氧树脂Epon812与硬化剂DDSA、MNA按比例混合

  2. 包埋程序‌:

    • 树脂渗透:环氧丙烷与树脂1:1混合浸透2小时

    • 纯树脂包埋:60℃聚合48小时

  3. 超薄切片‌:

    • 切片厚度控制在60-80nm(灰色干涉色)

    • 使用钻石刀切取,铜网收集切片

染色处理

  1. 醋酸铀染色‌:

    • 2%醋酸铀乙醇溶液染30分钟

  2. 柠檬酸铅染色‌:

    • Reynold's柠檬酸铅染5-10分钟

    • 注意避免二氧化碳污染

观察要点

  • 细胞膜系统‌:观察质膜完整性、线粒体脊结构

  • 细胞核‌:染色质分布状态、核膜连续性

  • 特殊结构‌:

    • 干细胞伪足形态(胚胎样干细胞可见花多样伪足)

    • 铁死亡细胞特征(线粒体缩小、膜密度增加)

注意事项

  1. 样品质量‌:

    • 避免人工假象(如冰晶损伤、收缩裂隙)

    • 凋亡细胞需与坏死细胞鉴别(染色质边集vs均匀肿胀)

  2. 操作规范‌:

    • 锇酸废液需专用容器收集

    • 铅染色需在NaOH干燥环境中进行

  3. 设备参数‌:

    • 加速电压通常设置80-120kV

    • 使用CCD相机记录图像(避免长时间电子束照射)





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