透射电镜观察细胞形态实验

实验原理

透射电子显微镜(TEM)利用高能电子束穿透超薄样品，通过电磁透镜成像系统放大观察细胞超微结构
。其分辨率可达0.1-0.2nm，能清晰显示细胞膜、细胞器、染色质等亚显微结构
。

关键实验步骤

样品前处理

1. ‌细胞固定‌：

• 2.5%戊二醛(0.1M PBS配制)4℃初固定2-4小时
  

• 1%锇酸后固定1-2小时(需避光操作)
  

2. ‌脱水处理‌

• 梯度乙醇(50%-100%)逐级脱水
  

• 环氧丙烷作为中间过渡溶剂
  

包埋与切片

1. ‌包埋剂配制‌：

• 环氧树脂Epon812与硬化剂DDSA、MNA按比例混合
  

2. ‌包埋程序‌：

• 树脂渗透：环氧丙烷与树脂1:1混合浸透2小时
  

• 纯树脂包埋：60℃聚合48小时
  

3. ‌超薄切片‌：

• 切片厚度控制在60-80nm(灰色干涉色)
  

• 使用钻石刀切取，铜网收集切片
  

染色处理

1. ‌醋酸铀染色‌：

• 2%醋酸铀乙醇溶液染30分钟
  

2. ‌柠檬酸铅染色‌：

• Reynold's柠檬酸铅染5-10分钟
  

• 注意避免二氧化碳污染
  

观察要点

• ‌细胞膜系统‌：观察质膜完整性、线粒体脊结构
  

• ‌细胞核‌：染色质分布状态、核膜连续性
  

• ‌特殊结构‌：

• 干细胞伪足形态(胚胎样干细胞可见花多样伪足)
  

• 铁死亡细胞特征(线粒体缩小、膜密度增加)
  

注意事项

1. ‌样品质量‌：

• 避免人工假象(如冰晶损伤、收缩裂隙)
  

• 凋亡细胞需与坏死细胞鉴别(染色质边集vs均匀肿胀)
  

2. ‌操作规范‌：

• 锇酸废液需专用容器收集
  

• 铅染色需在NaOH干燥环境中进行
  

3. ‌设备参数‌：

• 加速电压通常设置80-120kV
  

• 使用CCD相机记录图像(避免长时间电子束照射)

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