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细胞增殖-干细胞成球实验

简要描述:细胞增殖-干细胞成球实验是伊莱博生物的服务项目之一,由细胞平台专业的实验技术人员操作完成。

  • 更新时间:2025-05-14
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:932

详细介绍

品牌其他品牌应用领域医疗卫生,生物产业

实验原理

干细胞成球实验(sphere-formation assay)是一种基于非贴壁依赖培养条件的干细胞筛选技术
。在无血清但富含特定细胞因子的培养环境中,具有干性的细胞能够聚集成团形成三维球体结构,而普通分化细胞则因缺乏贴壁条件而凋亡
。这种球体结构能模拟体内干细胞微环境,是评估细胞自我更新能力的金标准

实验材料

  • 细胞样本‌:对数生长期干细胞(推荐60-80%融合度)

  • 特殊耗材‌:

    • 超低吸附培养板(6/12/24孔)

    • 细胞筛(70μm孔径)

  • 培养基组分‌:

    • 基础培养基(DMEM/F12或1640)

    • B27营养液(50X)

    • 重组生长因子(EGF 10ng/mL, bFGF 10ng/mL)

    • 胰岛素(5μg/mL)

实验步骤

一次成球培养

  1. 消化收集细胞,PBS清洗2次去除血清

  2. 细胞计数后,以1000个细胞/孔密度接种于超低吸附6孔板

  3. 加入无血清成球培养基(含EGF+bFGF)

  4. 37℃、5% CO₂培养7-10天

二次成球验证

  1. 70μm细胞筛过滤收集原代球体

  2. 消化成单细胞悬液,PBS重悬

  3. 按相同条件进行二次培养

  4. 计算球体形成效率(SFE)=球体数/接种细胞数×100%

关键参数

  • 接种密度‌:500-2000个细胞/孔(密度过高易导致球体融合)

  • 培养周期‌:7-14天(定期镜下观察球体形态)

  • 鉴定标准‌:

    • 直径>50μm的球体计为有效克隆

    • 连续传代3次仍保持成球能力

应用领域

  • 肿瘤干细胞研究‌:富集CD44+/CD133+肿瘤起始细胞

  • 药物筛选‌:评估靶向干细胞药物的效果

  • 衰老研究‌:检测脂肪祖细胞(APCs)的年龄相关活化





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