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脱蜡至水
依次浸泡:二甲苯Ⅰ 20min → 二甲苯Ⅱ 20min → 无水乙醇Ⅰ 5-10min → 无水乙醇Ⅱ 5-10min → 梯度酒精(95%→70%)各5min → 蒸馏水冲洗
。
番红染色
浸入1%番红染液1-2小时(软骨染色),自来水冲洗去除多余染料
。
部分方案需梯度酒精(50%-80%)脱色各1分钟
。
固绿染色
0.5%固绿染液浸染30-60秒(骨组织染色),无水乙醇快速脱色30秒
。
弱酸溶液(如冰醋酸)分化10-15秒以去除残留染料
。
脱水与封片
快速脱水:95%乙醇→无水乙醇各15秒 → 二甲苯透明5分钟 → 中性树胶封片
。
染色顺序:番红(碱性)先染软骨,固绿(酸性)后染骨组织,避免交叉干扰
。
分化控制:固绿染色后需快速分化,防止过度脱色导致信号减弱
。
结果判读:
阳性信号:软骨呈红色,骨组织或木质化细胞壁呈绿色
。
背景:应为无色或浅色,否则需调整分化时间
。
脱蜡:延长二甲苯浸泡时间至30分钟
。
染色不均:确保染液新鲜,切片浸入液体中
。
如需植物样本染色(如杨梅花),需调整固定和脱水时间
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