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脱蜡至水
依次浸泡：二甲苯Ⅰ 20min → 二甲苯Ⅱ 20min → 无水乙醇Ⅰ 5-10min → 无水乙醇Ⅱ 5-10min → 梯度酒精（95%→70%）各5min → 蒸馏水冲洗
。
番红染色
浸入1%番红染液1-2小时（软骨染色），自来水冲洗去除多余染料
。
部分方案需梯度酒精（50%-80%）脱色各1分钟
。
固绿染色
0.5%固绿染液浸染30-60秒（骨组织染色），无水乙醇快速脱色30秒
。
弱酸溶液（如冰醋酸）分化10-15秒以去除残留染料
。
脱水与封片
快速脱水：95%乙醇→无水乙醇各15秒 → 二甲苯透明5分钟 → 中性树胶封片
。
染色顺序：番红（碱性）先染软骨，固绿（酸性）后染骨组织，避免交叉干扰
。
分化控制：固绿染色后需快速分化，防止过度脱色导致信号减弱
。
结果判读：
阳性信号：软骨呈红色，骨组织或木质化细胞壁呈绿色
。
背景：应为无色或浅色，否则需调整分化时间
。
脱蜡：延长二甲苯浸泡时间至30分钟
。
染色不均：确保染液新鲜，切片浸入液体中
。
如需植物样本染色（如杨梅花），需调整固定和脱水时间
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