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高尔基染色法
固定:新鲜脑组织用10%甲醛或混合液(重铬酸钾+甲醛)固定24小时以上
。
镀银:3.5%重铬酸钾处理3-7天→AgNO₃溶液避光浸染2-6天
。
切片:火棉胶包埋后切20-100μm厚片,二甲苯透明封片
。
原理:通过重铬酸钾和AgNO₃反应沉积金属银,使神经元胞体、树突(含树突棘)及轴突呈黑色
。
步骤:
Bielschowsky改良法
应用:显示神经纤维瘤、轴突等,阳性信号为深棕色/黑色
。
关键:银溶液浸染后需还原剂处理,避免非特异性沉积
。
质量控制:
镀银时间需优化,过短导致背景染色,过长致信号缺失
。
分色步骤需显微镜下监控,确保神经元与背景对比清晰
。
样本处理:
新鲜组织固定后需充分冲洗,避免残留固定剂干扰银染
。
阳性结构:
高尔基法:神经元全形态(树突棘、轴突分支)
。
Cajal银染:神经原纤维网状排列,突触终扣呈环状
。
常见问题:
背景过深:需调整AgNO₃浓度或缩短染色时间
。
神经环路研究:如小鼠后顶叶皮层神经元投射分析
。
病理诊断:鉴别神经系统肿瘤(如神经纤维瘤)
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