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样本前处理
固定：组织需用10%中性福尔马林或4%多聚甲醛固定24小时以上
。
脱水包埋：常规梯度酒精脱水、透明后石蜡包埋，切片厚度建议5μm
。
脱蜡至水
依次浸泡：二甲苯Ⅰ 20min → 二甲苯Ⅱ 20min → 无水乙醇Ⅰ 5min → 无水乙醇Ⅱ 5min → 75%酒精5min → 蒸馏水冲洗3遍
。
普鲁士蓝染色
染液配制：等体积混合2%K₄[Fe(CN)₆与2%盐酸溶液
。
染色时间：切片浸入染液30分钟至1小时（根据组织类型调整）
。
冲洗：蒸馏水洗2遍终止反应
。
复染与封片
核固红复染：1-5分钟染细胞核，流水冲洗
。
脱水透明：无水乙醇脱水（两缸各5分钟）→ 二甲苯透明（两缸各5分钟）→ 中性树胶封片。
阳性信号：三价铁沉积呈蓝色颗粒（如含铁血黄素）
。
细胞核：核固红复染后呈红色
。
染液新鲜度：K₄[Fe(CN)₆与盐酸需现配现用，避免失效
。
分化控制：显微镜下观察蓝色信号，避免过度冲洗导致脱色
。
封片技巧：二甲苯未干时快速封片，防止高倍镜下出现结晶伪影6。
病理诊断：检测肝脏、骨髓中的铁代谢异常
。
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