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样本前处理
固定:组织需用10%中性福尔马林或4%多聚甲醛固定24小时以上
。
脱水包埋:常规梯度酒精脱水、透明后石蜡包埋,切片厚度建议5μm
。
脱蜡至水
依次浸泡:二甲苯Ⅰ 20min → 二甲苯Ⅱ 20min → 无水乙醇Ⅰ 5min → 无水乙醇Ⅱ 5min → 75%酒精5min → 蒸馏水冲洗3遍
。
普鲁士蓝染色
染液配制:等体积混合2%K₄[Fe(CN)₆与2%盐酸溶液
。
染色时间:切片浸入染液30分钟至1小时(根据组织类型调整)
。
冲洗:蒸馏水洗2遍终止反应
。
复染与封片
核固红复染:1-5分钟染细胞核,流水冲洗
。
脱水透明:无水乙醇脱水(两缸各5分钟)→ 二甲苯透明(两缸各5分钟)→ 中性树胶封片。
阳性信号:三价铁沉积呈蓝色颗粒(如含铁血黄素)
。
细胞核:核固红复染后呈红色
。
染液新鲜度:K₄[Fe(CN)₆与盐酸需现配现用,避免失效
。
分化控制:显微镜下观察蓝色信号,避免过度冲洗导致脱色
。
封片技巧:二甲苯未干时快速封片,防止高倍镜下出现结晶伪影6。
病理诊断:检测肝脏、骨髓中的铁代谢异常
。
外包服务:可联系伊莱博生物科技等专业机构
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