细胞染色实验服务

一、基础染色技术

1. HE染色(苏木精-伊红染色)

• ‌原理‌：苏木精(碱性染料)与带负电荷的DNA结合染蓝紫色细胞核；伊红(酸性染料)与带正电荷的蛋白质结合染粉红色细胞质
  

• ‌流程‌：

1. 样品制备：细胞接种于含盖玻片的培养瓶，CO₂培养箱培养至单层
   

2. 固定：95%乙醇固定15分钟，PBS洗涤
   

3. 核染色：苏木精染5-10分钟→盐酸乙醇分色→氨水蓝化
   

4. 质染色：伊红染5-10分钟
   

5. 脱水透明：梯度乙醇脱水，二甲苯透明
   

6. 封片观察：中性树胶封固，光镜观察
   

2. 荧光染色技术

• ‌鬼笔环肽染色‌：标记微丝结构，FITC标记后与DAPI核染色配合使用
  

• ‌线粒体染色‌：使用MitoTracker系列染料，利用线粒体膜电位特性特异性标记
  

二、实验操作要点

1. 通用流程

1. ‌细胞准备‌：以2-10×10³ cell/coverslip密度接种，培养48小时
   

2. ‌固定‌：3.7-4%甲醛/PBS室温固定10分钟
   

3. ‌穿膜‌：0.1% Triton X-100 + 0.1M Glycine冰上处理30分钟
   

4. ‌封闭‌：5mg/ml BSA室温封闭1小时
   

5. ‌染色‌：根据目标结构选择特异性染料

2. 活死细胞染色

• 使用Calcein AM(标记活细胞)和PI(标记死细胞)双染

• 共聚焦显微镜观察

三、前沿技术发展

最新研究开发了"数字孪生"技术，通过AI驱动的3DCellScope系统实现类器官高速3D分析，突破传统染色方法的局限
。该方法能：

• 多级分割(细胞核/细胞/类器官)

• 量化3D形态学和拓扑学特征

• 无需复杂染色即可分析微重力等条件下的细胞响应

四、注意事项

• 染料工作浓度需精确配置

• 不同结构需要匹配特定染料(如DAPI染核，MitoTracker染线粒体)

• 染色时间影响结果质量，通常30-60分钟

• 保持pH稳定(如HE染色需pH6.7-6.8)