详细介绍
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原理:苏木精(碱性染料)与带负电荷的DNA结合染蓝紫色细胞核;伊红(酸性染料)与带正电荷的蛋白质结合染粉红色细胞质
流程:
样品制备:细胞接种于含盖玻片的培养瓶,CO₂培养箱培养至单层
固定:95%乙醇固定15分钟,PBS洗涤
核染色:苏木精染5-10分钟→盐酸乙醇分色→氨水蓝化
质染色:伊红染5-10分钟
脱水透明:梯度乙醇脱水,二甲苯透明
封片观察:中性树胶封固,光镜观察
鬼笔环肽染色:标记微丝结构,FITC标记后与DAPI核染色配合使用
线粒体染色:使用MitoTracker系列染料,利用线粒体膜电位特性特异性标记
细胞准备:以2-10×10³ cell/coverslip密度接种,培养48小时
固定:3.7-4%甲醛/PBS室温固定10分钟
穿膜:0.1% Triton X-100 + 0.1M Glycine冰上处理30分钟
封闭:5mg/ml BSA室温封闭1小时
染色:根据目标结构选择特异性染料
使用Calcein AM(标记活细胞)和PI(标记死细胞)双染
共聚焦显微镜观察
最新研究开发了"数字孪生"技术,通过AI驱动的3DCellScope系统实现类器官高速3D分析,突破传统染色方法的局限
。该方法能:
多级分割(细胞核/细胞/类器官)
量化3D形态学和拓扑学特征
无需复杂染色即可分析微重力等条件下的细胞响应
染料工作浓度需精确配置
不同结构需要匹配特定染料(如DAPI染核,MitoTracker染线粒体)
染色时间影响结果质量,通常30-60分钟
保持pH稳定(如HE染色需pH6.7-6.8)
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