细胞JC-1染色实验

JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(~525nm)为主;而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在-定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na和H流调控。当线粒体状态良好时对JC-1摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-1的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membranepotential),而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1 染色被用于检测调亡的早期发
生。其实验方法如下。
JC-1染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1 ~ 5mg/ml)，储存于-20C，用时以培养液稀释至10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min 后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿
信号强度，计算其强度比。