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WGA 是植物凝集素,特异性结合细胞膜糖蛋白 / 糖脂上的 N - 乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)与唾液酸残基。
荧光标记 WGA(如Alexa Fluor 488/555/647、FITC、Cy5.5)结合后,在对应激发光下发出荧光,清晰勾勒细胞膜轮廓。
关键:不做透化→仅染细胞膜;做透化→可染高尔基体、糖基化蛋白。
细胞膜 / 糖萼 / 基底膜 / 几丁质:荧光色(依标记染料)
FITC/Alexa 488:绿色(Ex 488 nm / Em 519 nm)
Alexa 555/Cy3:红色(Ex 555 nm / Em 565 nm)
Alexa 647/Cy5.5:远红 / 近红外(Ex 647 nm / Em 668 nm)
细胞核:蓝色(DAPI 复染,Ex 358 nm / Em 461 nm)
背景:极低荧光
活细胞、固定细胞爬片
石蜡 / 冰冻组织切片(肝、肾、肺、心肌、皮肤、神经)
类器官、3D 培养
真菌(几丁质)、革兰氏阳性菌、酵母
细胞膜轮廓标记:细胞形态、肥大 / wei缩、迁移、共定位
基底膜 / 糖萼:肾、肺、血管、肿瘤间质糖基化
纤维化:与天狼猩红 / Masson 共染,定位胶原与膜结构
微生物:真菌细胞壁、细菌膜、酵母出芽疤痕
神经科学:顺行 / 逆行示踪、突触标记
活细胞:PBS 洗 2 次,直接染色(不固定、不透化)
固定细胞:4% 多聚甲醛固定 15–20 min,PBS 洗,不透化
石蜡切片:脱蜡→梯度酒精→水→抗原修复(EDTA pH8.0,可选)→PBS 洗
工作浓度:5–10 μg/mL(荧光 WGA 溶于 PBS)
孵育:室温 / 37℃ 10–30 min(活细胞≤20 min,防毒性)
PBS 洗 3×5 min,去未结合 WGA
DAPI(1 μg/mL)复染核:室温避光 5–10 min,PBS 洗
抗荧光淬灭封片剂封片
荧光 / 共聚焦显微镜,按染料选激发 / 发射通道
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