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TUNEL检测技术服务

简要描述:TUNEL技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋心细胞进行染色,能准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性核酸内切酶被激活而将自身染色体DNA切断成缺口或3-OH末端片段这一特点,利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物的脱氧核苷酸转移到3-0H末端,再用免疫组化法或免疫荧光检测凋亡细胞。上海伊莱博致力于临床前药效学CRO实验,有着多年的TUNEL检测技术服务的经验

  • 更新时间:2022-12-27
  • 厂商性质:代理商
  • 访  问  量:43

详细介绍

1.用二甲苯浸洗2次,每次5min;

2.用梯度7醇(100.95.90.80、70%)各浸洗1次,每次3min:注:上面两步是针对石蜡切片样木的外理

3.用Proteinase K作液外理组织15 30 min 在21-370(温度、时间、浓度均需摸索)或者加细胞通透液8min

4.PBS漂洗2次;

5.制备TUNEL反应混合液,处理组用50ulTdT+450ul 荧光素标记的dUTP液混匀;而阴性对照组仅加50ul 荧光素标记的dUTP液,阳性对照组先加入100ul DNase 1,反应在15~25℃x10min,后面步骤同处理组。

6.玻片干后,加50uI TUNEL反应混合液(阴性对照组仅加50u荧光素标记的dUTP液)于标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃x1h。

7.PBS漂洗3次;

8. 可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞(激发光波长为450~500nm,检测波长为515~565nm);

9.玻片干后加50ul converter-POD干标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37°cx30min.

10.PBS漂洗3次,

11.在组织处加50~100uIDAB底物,反应15~25℃℃x10min;

12.PBS漂洗3次;

13.拍照后再用苏木素或电其绿复染,几秒后立即用自来水冲洗。梯度洒精脱水,二电苯透明,中性树胶封片。

14.加一滴PBS或甘油在视野下,用光学显微错观察凋广细胞(共计200~500个细胞)并拍照,可结合调广细胞形太特征来综合判断(未染色细胞变小,胞膜完整但出现发泡现象,晚期出现凋亡小体,贴壁细胞出现邹缩、变圆、脱落;而染色细胞呈现染色质浓缩、边缘化,核膜裂解,染色质分割成块状/凋亡小体。

我们拥有专业的实验室、先进的实验设备和经验丰富的科研技术人员。技术团队包括研究员(博士后)2人,助理研究员(博士)4人,核心研究员(硕士)15人,主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。通过高度细分、较好的的服务平台,为广大客户提供了完善的技术解决方案和服务。目前,及,涉及临床医学、肿瘤生物学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学、医学等诸多领域。


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