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免疫共沉淀CO-IP实验技术服务

简要描述：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是研究蛋白-蛋白间相互作用的经典方法，属于免疫沉淀技术的一类，常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。免疫共沉淀的设计理念是，假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员，那么利用这种蛋白的特异性抗体，就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉"下来（常说的“pull-down"），进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员

更新时间：2026-03-20
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一、实验原理

利用特异性抗体将目标蛋白（诱饵蛋白）从总蛋白中 “拉下来"，

与其 ** 结合的目的蛋白（猎物蛋白）** 会被共同沉淀，再用 WB 检测。

二、试剂与耗材

温和裂解液（NP-40 或 RIPA 低浓度，不能用高 SDS）
蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂
Protein A/G 琼脂糖珠 / 磁珠
一抗（IgG 同型对照）
电泳、转膜、WB 全套试剂

三、标准实验步骤（通用版）

1. 蛋白提取（温和裂解）

细胞 / 组织冰上裂解 30 min
裂解液用 NP-40 体系，避免强变性剂
4℃ 12000 rpm 离心 15 min，取上清
BCA 定量，统一蛋白量（常用 1–2 mg/IP）

2. 预清除（减少非特异性结合）

加入 Protein A/G 珠子
4℃ 孵育 30–60 min
离心去珠子，取上清

3. 免疫沉淀（核心步骤）

分组：

实验组：目标蛋白一抗
对照组：IgG 同型对照

4℃ 缓慢旋转孵育过夜（4–12 h）

4. 结合珠子

加入 Protein A/G 珠子
4℃ 孵育 2–4 h

5. 洗涤（关键，去杂蛋白）

低渗洗涤液洗 3–4 次
每次 5 min，4℃ 旋转
弃尽上清

6. 蛋白洗脱与变性

加入 2× 上样缓冲液
煮沸 5–10 min
离心取上清，上样跑胶

7. WB 检测互作蛋白

跑胶 → 转膜 → 封闭 → 一抗二抗 → 显影
检测：诱饵蛋白 + 互作蛋白

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免疫共沉淀CO-IP实验技术服务

一、实验原理

二、试剂与耗材

三、标准实验步骤（通用版）

1. 蛋白提取（温和裂解）

2. 预清除（减少非特异性结合）

3. 免疫沉淀（核心步骤）

4. 结合珠子

5. 洗涤（关键，去杂蛋白）

6. 蛋白洗脱与变性

7. WB 检测互作蛋白

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